1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
研究意义:
菘蓝(Isatis indigotica Fort .)为十字花科植物,其根和叶均可入药,干燥根入药为板蓝根,具有清热解毒、凉血利咽的功效;干燥叶入药为大青叶,具有清热解毒、凉血消斑的功效[1]。两者皆为传统大宗药材。菘蓝含有靛蓝、靛玉红等吲哚类生物碱、黄酮类、氨基酸、多糖等主要化学成分[2-4]。现代研究表明,菘蓝根部提取的活性成分具有较好的抗甲型流感病毒的作用,且呈剂量效应关系[5]。板蓝根多糖还能提高免疫功能,能明显增强抗体形成细胞功能[6];李吉萍等通过板蓝根多糖对荷瘤小鼠的作用研究,进一步表明板蓝根多糖能够增强荷瘤小鼠的免疫功能,对荷瘤小鼠具有抗肿瘤作用,可延长荷瘤小鼠的生存时间[7]。刘富康通过优化后的大青叶粗黄酮提取工艺,将提取的粗黄酮用于抑菌试验,试验结果显示大青叶粗黄酮对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和李斯特菌都有明显抑制作用,可作为一种效果优良的天然防腐剂[8]。夏小艳等通过大青叶中靛玉红的抗血管生成活性试验,证实靛玉红能显著抑制发育24 h的斑马鱼胚胎的血管生成以及7 d龄的鸡胚的血管生成,并呈现较好的剂量效应关系,为大青叶中靛玉红的进一步开发利用提供理论指导[9]。因此,作为传统清热解毒中药板蓝根和大青叶的基原植物,菘蓝应用广泛,是一种很有开发前景的中药资源,具有较高的研究价值。目前针对菘蓝功能基因的研究已较为广泛,已成功克隆出菘蓝CYP83B1基因、IiCYP79F1基因、开花抑制基因IiFLC等,并对各基因的功能及表达进行分析[10-12]。但还尚未发现关于菘蓝内参基因筛选的相关研究。本试验基于菘蓝转录组测序数据,利用实时荧光定量PCR技术,结合geNorm 、NormFinder和BestKeeper三个内参基因分析软件,筛选出营养生长期菘蓝在不同组织和处理下表达最稳定的内参基因,为菘蓝的相关基因研究中检测不同组织或处理下基因的表达量提供参考,增强基因表达分析的准确性,为菘蓝的进一步开发研究提供基础[13-16]。
国内外研究概况:
2. 研究的基本内容和问题
项目研究目标:
(1)筛选出菘蓝在不同处理和组织中表达稳定性最好的内参基因。
(2)探讨菘蓝各候选基因在不同条件下表达稳定性存在的差异。
3. 研究的方法与方案
实验方案:
(1)材料的准备
试验采用山西省采集的菘蓝种子,播种于塑料盆内,进行常规管理,及时间苗,保证每一盆长势一致。30 d后,对材料进行处理。试验样品共分为三组,包括NACl处理后0、4、8、12、24 h的菘蓝叶片,PEG处理后0、4、8、12、24 h的菘蓝叶片以及采集到的菘蓝新鲜根、茎、叶、叶柄不同组织,每个处理收集3个生物重复,样品采集后立即液氮冷冻,于-80 ℃储存备用。
4. 研究创新点
特色或创新之处
首次以菘蓝为原材料,针对多个候选基因,研究菘蓝在不同组织和处理条件下各基因表达稳定性之间存在的差异,筛选出在不同条件下表达稳定性较佳的内参基因,为进一步研究菘蓝相关功能基因的表达提供参考,增强分析结果的准确性。
5. 研究计划与进展
研究计划及预期进展
本研究预期在12个月内完成:2018年5月——2019年5月。
2018年4月——2018年5月:进行前期工作,查找文献资料,完成研究方案的设计。
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