海滨雀稗耐盐基因AKR的克隆与序列分析开题报告

 2023-02-12 12:33:06

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

土地的盐碱化是一个世界范围内的生态问题,目前全球范围内的土地盐碱化程度呈现明显的上升趋势。为了保障我国的粮食生产安全,改善生态环境,实现资源的可持续利用,加快盐碱地改良技术的发展迫在眉睫[1-2]。中国的盐渍土资源量多且分布广泛。据全国第二次土壤普查数据,中国盐渍土总面积约3600万hm2,占全国可利用土地面积的4.88%。耕地中盐渍化面积达到920.9万hm2,占全国耕地面积6.62%[3]。加上中国人多地少的国情来看,开发合理利用盐碱地是很有必要的一项政策。为了合理开发盐渍土地资源,提高农业生产效率,已经制定了一系列的举措,其中抗盐植物的选育与利用是提高盐渍土壤生产力和利用率直接而有效的措[4-5]

在生物技术日新月异的21世纪,利用生物技术育种可以避免传统育种时间长、效率低且耗资大的劣势,是新一代的育种方法[6]。耐盐基因的储备是利用生物技术育种中的一个重要的环节,农业部在农业科技发展规划中多次提出要抓住机遇抢先挖掘一些有价值的自主产权基因,从而在国际大趋势中占有一席之地。因此,抗盐基因的挖掘显得刻不容缓,从而使我国在耐盐植物育种方面的国际竞争中抢占先机。

以往报道的抗盐基因主要来源于拟南芥、水稻和高粱等模式植物,涉及离子平衡,渗透调节,抗氧化系统,转录因子等[7]。但大部分的耐盐基因都是从非盐生植物中获取的,在盐生植物中获得的基因很少,尤其在耐盐性极高的海滨雀稗中获得耐盐基因鲜有报道。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:利用海滨雀稗的cDNA酵母表达文库筛选盐胁迫相关基因,并进行序列分析。

内容: 酵母感受态的制备,挑单克隆,提质粒,转大肠杆菌,测序及序列分析。解决关键问题:醋酸锂介导的化学方法转化文库,提高酵母表达文库质量。

3. 研究的方法与方案

研究方法:

1酵母感受态的制备和转化 从单缺平板上挑单克隆到YPDA液体培养基中, 30 ℃, 200 rmin-1培养过夜。 将过夜培养物全部倒入100 mL YPDA 液体培养基中, 30 ℃, 200 rmin-1培养到吸光度OD600= 0.6 制备酵母感受态并将cDNA文库转入,将制备好的酵母菌涂在SD(ura-)、含500mM盐浓度的平板上,长3-5天

2挑单克隆 用枪吸取350μL的SD(ura-)液体培养基到1.5mL的离心管中,用枪头挑取单克隆放入离心管中,震荡后放入摇床30 ℃, 200 rmin-1过夜摇。

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4. 研究创新点

首次利用海滨雀稗的cDNA酵母表达文库筛选盐胁迫相关基因。

5. 研究计划与进展

本研究严格按照试验设计的内容进行,进度安排如下: 2013年09月-2013年10月 查阅资料及相关文献确定试验方案 2013年11月-2014年12月 学习实验技能并进行预实验 2014年01月-2014年02月 利用海滨雀稗的cDNA酵母表达文库筛选盐胁迫相关基因 2014年03月-2014年05月 基因序列分析并撰写毕业论文

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