1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）
一、课题意义：
猪胚胎的冷冻保存具有可以提高优质遗传资源利用效率，阻止通过动物传播疾病，降低猪运输成本等优点。但由于猪胚胎中含有大量的脂肪颗粒，因而其对低温十分敏感，使用慢速冷冻方式很难实现与人工授精等价的受胎率和产仔数。Cryotop是一种当前被广泛使用的玻璃化冷冻保存方法，可以很大程度上提高猪胚胎的冷冻效率。然而，Cryotop的冷冻效率仍没有达到最理想状态。本研究以体外成熟卵子经孤雌激活所获胚胎为研究模型，试图在现有Cryotop的玻璃化冷冻技术的基础上,通过统计不同发育阶段进行离心去脂的胚胎的冷冻效果，优化Cryotop玻璃化冷冻体系，以期提高猪胚胎冷冻成功率,为猪胚胎的冷冻保存提供借鉴。
二、国内外研究概况：
猪胚胎脂滴含量很高，对低温十分敏感。并且随着脂滴含量的变化，不同发育阶段猪胚胎冷冻保存的敏感性不同，发育阶段越早，其冷冻耐受力越低。2012年Li R等研究表明，孤雌激活（D0）后第四天（D4）为猪胚胎冷冻的最佳时期[1]。冷冻保存方法是猪胚胎冷冻保存成功的关键因素之一。自1997年Vajta发明OPS法并用于猪胚胎玻璃化冷冻后，猪玻璃化冷冻技术有了较快的发展[2]。近年来又相继出现了多种胚胎承载工具，如玻璃微细管法(Glass micropipette, GMP)、微滴法(Microdroplet)、电镜铜网格(Electron microscopic grids, EMG) 、冷冻环(Cryoloop vitrification, CLV) 法、固体表面法(Solid surface vitrification, SSV) 等，这些冷冻方法的出现，大大提高了冷冻速率和冻后胚胎存活率[3]。Cryotop是一种当前被广泛使用的玻璃化冷冻保存方法。2012年，Liu Y等证明，与OPS法相比，Cryotop冷冻速度更快、在液氮中的 exposed surface/volume 比例更高、渗透性保护剂浓度更低，溶液补充物（如SSS）更优，冷冻复苏率更高。对于高敏感性生物标本（包括猪卵母细胞）的冷冻保存，Cryotop玻璃化冷冻优于OPS技术[4]。另外， 冻前对猪胚胎进行一些辅助处理, 如细胞松弛素的添加、离心或离心去脂处理等[5 7], 也有效提高了冷冻效率。但总的说来猪胚胎冷冻保存距推广应用尚有一定距离，冷冻胚胎的体内外存活率相对较低[5,8,9]。
2. 研究的基本内容和问题
一、研究目标：
本研究以体外成熟卵子经孤雌激活所获胚胎为研究模型，试图在现有Cryotop的玻璃化冷冻技术的基础上,通过统计不同胚胎发育阶段进行离心去脂的冷冻效果，优化Cryotop玻璃化冷冻体系，以期提高猪胚胎冷冻成功率,为猪胚胎的冷冻保存提供借鉴。
二、研究内容：
3. 研究的方法与方案
一、研究方法：
在查阅文献、借鉴前人经验和以往成果的基础上进行适当改进，并通过实验进行实施，通过控制变量法得到相关结果。
二、技术路线(见附件）
4. 研究创新点
猪胚胎冷冻之所以如此困难，很大程度是由于其脂滴含量丰富，因此去脂理论上可以提高猪胚胎的冷冻效率，并且已经有实验证明了这一点。然而，目前还没有对猪孤雌激活胚胎离心去脂后，进行Cryotop冷冻的效果的讨论。本实验试图探索这一情况，并试图优化Cryotop冷冻体系。
5. 研究计划与进展
2013年10月 至 2014年02月 相关技术的熟练、掌握，实验的准备；
2014年02月 至 2014年05月 实验实施和数据采集；
2014年05月 至 2014年06月 实验数据处理分析、毕业论文的撰写及答辩；以上是毕业论文开题报告，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
