1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
目前国内外有很多针对动物源性致病菌的PCR、实时荧光PCR的检测方法,本课题旨在针对常见猪源病毒,设计引物,进行PCR扩增,然后通过胶回收测序的方法,确定病毒的基因序列,验证PCR技术的可行性,为几种常见猪源病毒提供检测方法。并且用通用核酸检测免疫金试纸条检测PCR产物,避免电泳检测耗时、易污染、有毒害,为进出口检疫提供一种较普通PCR更安全快捷,较实时PCR法、PCR-DHPLC、基因芯片法更简便的检测方法。本课题的研究对常见猪源病毒的检测有一定的应用价值。
1.5种猪病多重PCR检测方法的建立王隆柏1,张志刚2,苏永裕2,车勇良1,吴学敏1,周伦江1(1.福建省农业科学院畜牧兽医研究所,福建省畜禽疫病防治工程技术研究中心,福建福州 350013;2.肉食品安全生产技术国家重点实验室,福建厦门 361100)
2.PCR-核酸试纸条法检测食品中假结核耶尔森菌莎日娜 1, 赵良娟 2, 庞 璐 2, 张宏伟 2*(1. 天津医学高等专科学校, 天津 300222; 2. 天津海关, 天津 300461)
2. 研究的基本内容和问题
目标
1.建立猪群常见疫病的PCR诊断方法,主要为PPV,PRRSV,PCV,PEDV,FMDV的PCR诊断方法,并通过测序进行验证;
2.建立针对猪繁殖与呼吸综合征病毒的PCR-试纸条检测方法;
3. 研究的方法与方案
4. 研究创新点
聚合酶链式反应(Polymerase chainreaction,PCR)在当今生物和医学领域是一项热门的核酸扩增技术,其主要程序包括核酸的变性、退火和延伸。在核酸扩增过程中,模板DNA能够在短时间内克隆出数百万倍甚至上千万的子链 DNA。
本课题旨在通过选择几种常见猪源病毒的保守基因序列,设计相应的特异性引物,进行PCR检测,验证该种检测方法的高特异性、灵敏性以及为未来在进出口检疫作出一份贡献。
猪繁殖与呼吸综合征是猪群发生以繁殖障碍和呼吸系统症状为特征的一种急性、高度传染的病毒性传染病。该病在上个世纪八十年代末、九十年代初,曾经迅速传遍世界各个养猪国家,在猪群密集、流动频繁的地区更易流行,常造成严重经济损失。近几年,该病在国内呈现明显的高发趋势,对养猪业造成了重大损失,已成为严重威胁我国养猪业发展的重要传染病之一。
5. 研究计划与进展
2018.9—2018.10 完成几种常见猪源病毒的选取,筛选特性目的基因片段并鉴定;针对目的基因,设计合适的引物并标记;送去生物公司进行病毒质粒以及引物的合成
2018.10—2018.12 做PCR实验,对PCR的反应条件进行优化,胶回收后送生物公司进行测序,验证;
2018.12—2019.1 完成针对猪繁殖与呼吸综合征病毒的PCR-试纸条检测方法;
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