昆虫细胞悬浮培养增殖重组杆状病毒条件优化开题报告

 2023-02-11 13:12:05

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等(列出主要参考文献)

一:国内外研究概况

1983年12月, Smith等报道了采用重组杆状病毒(Baculovirus,BV)感染昆虫细胞表达外源基因的工作,他们将人干扰素-β(Interferon-β,IFN-β)编码基因克隆在BV多角体蛋白启动子下游,在体外培养的昆虫细胞成功表达出重组人IFN-β。

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2. 研究的基本内容和问题

研究目标:1.优化昆虫细胞最佳培养条件

2.优化杆状病毒最佳增殖条件

拟解决的问题:

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3. 研究的方法与方案

研究方法,技术路线,实验方案:

究方法:

(1)昆虫细胞悬浮培养(摇瓶)

初始密度(1106 )→培养96小时

每隔24小时取样,检测细胞密度

生化指标 Gluc ,Glu , Gln ,NH4 ,Lac . 生化指标。

得到细胞峰值时候的培养基中各指标。

(2)重组杆状病毒增殖优化

SF9细胞培养至一定细胞密度,进行细胞离心,采用新鲜的培养基按照一定的细胞密度进行重悬,接种不同量的病毒。接毒后72h检测细胞存活率,收获病毒,检测病毒效价。分组如下表:

组别

细胞密度(106cell/ml)

接毒量(MOI)

1

0.5

2

0.5

1

3

2

4

0.5

5

1

1

6

2

7

0.5

8

2

1

9

2

可行性分析:农科院具备全套的实验设备材料和技术。具备实验基础。同时所在的实验室发表过多篇相关论文,且长期进行该项目研究具备理论基础。

4. 研究创新点

利用生化分析仪,分析细胞在生长过程中的培养基生化指标变化,与细胞生长情况和细胞活性共同分析,在摇瓶悬浮细胞培养中少见。

摇瓶悬浮培养sf9昆虫细胞增殖杆状病毒利用正交实验法研究接毒量(MOI)和接毒初始细胞密度和病毒增殖量的关系也属特色之处。

5. 研究计划与进展

预期的进展

(1)得到昆虫细胞最佳培养条件

得到最佳的Gluc,最佳Glu,最佳Gln,最佳NH4 ,最佳Lac值

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