1. 研究目的与意义
目前地球每年产生约13亿吨木质纤维素，是世界上最多的生物质资源。木糖是仅次于葡萄糖，含量第二的木质纤维素单糖，约占总质量的15-40%。将木糖转化为高附加值产物具有显著的环保和经济价值。
核糖-5-磷酸异构酶B（RpiB）是磷酸戊糖途径中的关键酶，广泛存在于微生物中，底物范围广泛（C4-C6）。所在课题组在前期研究发现，来源于苍白杆菌（Ochrobactrum sp.）的RpiB（OsRpiB）具有独特的底物特异性：对木糖具有微弱的活力，对葡萄糖没有活力。
在此基础上，课题组对其实施了定点突变，发现双突变体R94N/N137Q对木糖的活性提高了80%，并利用突变体完成了异构酶-异构酶和异构酶-还原酶的多酶级联反应，制备了D-核酮糖和D-阿拉伯糖醇等稀有糖（醇）。
2. 研究内容和预期目标
研究内容
1、构建适合OsRpiB突变的易错PCR体系
1.1 金属离子优化：在不同的Mg2＋或Mn2＋浓度下对OsRpiB进行PCR扩增，并对结果进行检验。
3. 研究的方法与步骤
1） PCR条件：预变性（95℃，3 min），变性（95℃，15 s），退火（65℃，15 s），延伸（72℃，60 s），25个循环，彻底延伸（72℃，5 min）。
2） PCR反应体系：Mix溶液（2） 12.5μL、模板 1.5μL、引物F、引物R 1μL
ddH2O 9μl
4. 参考文献
[1] 李路,张贵生.稀有糖的合成方法研究[J].有机化学,2008,28(7):1129-1137.
[2] IzumoriK. Bioproduction strategies for rare hexose sugars[J]. Die Naturwissenschaften,2002，89(3):120-124.
[3] Zhang RG,Andersson CE, Skarina T, et al. The 2. 2 resolution structure of RpiB /AlsBfrom Escherichia coli illustrates a new approach to the ribose-5-phosphateisomerase reaction[J]．J Mol Biol, 2003, 332(5):1083-1094.
5. 计划与进度安排
1）2024-12～2024-02：查阅文献资料，撰写开题报告。
2）2024-02～2024-03：OsRpiB的随机突变和筛选。
以上是毕业论文开题报告，课题毕业论文、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。
